L4440-dsEGFP/HT115 （DE3）甘油菌（EC001）
L4440-dsEGFP/HT115（DE3）菌株是表达EGFP双链RNA的大肠杆菌。HT115（DE3）为RNase III缺陷型菌株，可以减少dsRNA降解；其染色体整合了λ噬菌体DE3区，在IPTG诱导下能大量表达T7 RNA聚合酶。该菌株转化了EGFP双链RNA表达载体L4440-dsEGFP，该载体包含一段374bp的EGFP片段，两端连接一对T7启动子，可通过IPTG诱导表达EGFP双链RNA。
- 产品货号： EC001
- 产品规格： 1 mL
- 品牌： belongbio
- 产品参数
- 产品货号： EC001
- 产品规格： 1 mL
- 品牌： belongbio
产品信息
产品描述
L4440-dsEGFP/HT115(DE3)菌株是表达EGFP双链RNA的大肠杆菌。HT115（DE3)为RNase III缺陷型菌株，可以减少dsRNA降解；其染色体整合了λ噬菌体DE3区，在IPTG诱导下能大量表达T7 RNA聚合酶。该菌株转化了EGFP双链RNA表达载体L4440-dsEGFP，该载体包含一段368bp的EGFP片段，两端连接一对T7启动子，可通过IPTG诱导表达EGFP双链RNA。
操作方法
1. 用接种针或接种环蘸取L4440-dsEGFP/HT115（DE3)甘油菌，在含100 µg/mL氨苄青霉素的固体LB平板上划线分离。
2. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
dsRNA诱导表达及提取纯化
1. 活化菌株：用接种针或接种环蘸取L4440-dsEGFP/HT115（DE3）细胞甘油菌，在含100 µg/mL氨苄青霉素（Ampicillin，Amp）的固体LB平板上划线分离，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
2. 培养种子液：挑取L4440-dsEGFP/HT115（DE3) 新鲜单菌落接种至LB/Amp液体培养基中，置于摇床37℃、200 rpm过夜摇菌约12 ~ 16 h。
3. 接菌培养：按1% ~ 2%比例，转接种子液至新鲜LB/Amp液体培养基中，37℃，200 rpm 继续培养约2 ~ 4 h，至对数生长期中期（OD600=0.4 ~ 0.6）。
4. 诱导表达：添加IPTG至终浓度0.1 ~ 1 mM，继续37℃，200 rpm摇菌3 ~ 4h（或低温25 ~ 30℃，过夜诱导16 ~ 20 h）。
5. 收集菌体：4℃，6,000 ×g，离心10 min，弃上清，菌体-80℃冻存或直接用于dsRNA提取纯化。
6. 提取纯化：可参照植生优谷大肠杆菌表达dsRNA提取纯化试剂盒（磁珠法）（PU006）说明书进行dsRNA提取纯化。
数据结果
注意事项/操作建议
1. 收到的甘油菌需尽快活化，若暂时不用，可在-80℃保存6个月，请避免反复冻融。
2. 具体诱导表达条件，如培养基、诱导时间、诱导温度以及IPTG浓度可根据目的基因进行优化。
3. 提取dsRNA过程中，请使用RNase-free枪头和RNase-free离心管，并佩戴一次性手套及口罩。
4. 本产品仅供专业人员科研使用。
附件：L4440-dsEGFP质粒图谱及双链EGFP序列
L4440-dsEGFP质粒图谱
双链EGFP序列AGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTC
产品信息
名称 | 编号 | 规格 |
L4440-dsEGFP/HT115(DE3) | EC001 | 1 mL |
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