- 产品参数
- 产品货号： TR001
- 产品规格： 100 mL / 5×100mL
- 品牌： belongbio
产品信息
产品描述
BELONGBIO Zol Reagent适用于从各种动植物、细菌组织、细胞等样本中分离出高质量的Total RNA。BELONGBIO Zol Reagent是苯酚和异硫氰酸胍的单相溶液，具有极强的裂解能力，可在短时间内裂解细胞和组织样本，并有效抑制样本中RNA的降解，保持RNA的完整性。样品在该试剂中能够充分裂解，加入氯仿抽提后，离心分层形成上清层（含RNA）、中间层和鲜红色的有机层（下层），经异丙醇沉淀、乙醇洗涤便可得到高纯度的Total RNA。获得的Total RNA可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。
储存条件
2~8℃保存，避光保存。有效期12个月。
注意事项/操作建议
1. 本产品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害。使用时应穿戴防护物，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
2. 请穿实验服并佩戴一次性手套操作，避免RNase污染。建议所有操作均在冰上进行。
3. 样品用BELONGBIO Zol Reagent匀浆后，如果不加入氯仿进行下游实验，可先﹣70℃冻存，可保存一个月以上。
4. 本产品仅作科研用途。
参考用量
表1 每毫升BELONGBIO Zol Reagent能够充分裂解的最大样本量
实验流程
1. 样品处理
A. 贴壁细胞
弃去培养液，直接向直径3.5 cm的培养板中加入1 mL BELONGBIO Zol Reagent，覆盖并反复吹打裂解细胞。
注意：1）依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定BELONGBIO Zol Reagent的所需量（每10 cm2加1 mL)；2）加入BELONGBIO Zol Reagent量不足时，会导致DNA污染；3）贴壁细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时，细胞膜实际已完全裂开，释放RNA，继续后续实验即可。
B. 悬浮细胞
离心收集细胞沉淀，每5×106 ~ 1×107个细胞加入1 mL BELONGBIO Zol Reagent，用移液器反复吹打。
注意：加入BELONGBIO Zol Reagent前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。
C. 动、植物组织
取﹣70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨，按照表1加入适当量BELONGBIO Zol Reagent混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎，加入适当量BELONGBIO Zol Reagent，匀浆仪进行匀浆处理。
注意：样品体积不要超过加入BELONGBIO Zol Reagent体积的10%。
2. 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
3. （可选）4℃，12000 g 离心10 min，取上清。
注意：离心可去除样品中较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉，植物的块茎结节等。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂应尽量去除，取澄清的匀浆液进行后续实验。
总RNA提取
1. 向上述裂解液中加入1/5体积氯仿（如每1 mL BELONGBIO Zol Reagent加入0.2 mL氯仿）。盖紧离心管盖，剧烈震荡15 sec，室温静置2 ~ 3 min。4℃，12000 g离心10 ~ 15 min。
注意：1）离心后混合物可分3层：上层无色水样层，中间层，下层红色有机苯酚氯仿层。RNA存在于水样层中；2）上层容量约为所加BELONGBIO Zol Reagent总量的50 ~ 60%（如加入1 mL BELONGBIO Zol Reagent，上层水相约为500 ~ 600 μL）。建议吸取400 ~ 500 μL，以防吸到中间层造成DNA污染；3）有机相和中间层是蛋白和DNA，可用于后续抽提。
2. 小心吸取上层水相至新离心管中，加入1/2体积异丙醇（如每1 mL BELONGBIO Zol Reagent加入0.5 mL异丙醇）。颠倒混匀后室温放置10 min。4℃，12000 g离心10 min。
3. 小心弃去上清，加入等体积75％乙醇，涡旋充分洗涤，并轻弹管底，让沉淀悬浮起来。4℃，7500 g离心5 min，弃上清，注意不要丢失RNA沉淀。
4. 室温放置干燥5 ~ 10 min。加入30 ~ 100 μL Nuclease-free Water溶解RNA，待完全溶解后，取少量检测。RNA于-80℃保存。
注意：RNA沉淀不能彻底干燥，过分干燥会导致RNA溶解度降低。
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