- 产品参数
- 产品货号： WB003
- 产品规格： 100 mL/500 mL
- 品牌： belongbio
产品信息
产品描述
本试剂盒是一款通过化学发光方法检测蛋白质，具有高灵敏度的增强型化学发光底物。可通过与二抗上偶联的辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）发出荧光，从而通过X光片或其他化学发光成像设备检测样品，在免疫印迹分析过程中实现飞克级的蛋白检测（<1×10-15 g）。
储存条件
4℃保存，≤0℃运输，有效期一年。
产品特点
1. 灵敏度高：检测硝化纤维素膜或PVDF膜上飞克级的蛋白条带。
2. 信号持续时间长：在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出6 ~8 h的可检测光信号。
3. 性能稳定：试剂盒在室温下可稳定放置长达6个月，4℃条件下存放1年不影响使用。
注意事项
1. ECL工作液配制过程中吸取A液和B液时务必更换吸头，工作液新鲜配制后应立即使用，放置过久会影响检测灵敏度。
2. 各溶液使用后，请盖紧瓶盖，以防失效。特别是B液，含有氧化剂，比较容易被还原而失效。
3. 根据目的蛋白丰度不同，曝光时间可能是数秒至数小时。曝光时间不足会导致目的条带不明确，曝光时间过长会使背景加深。
4. 推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:5000 ~ 1:10000，二抗1:10000 ~ 1:15000。抗体浓度过高可能造成高背景或因条带过曝产生反白现象。
5. 印迹条带能够持续输出6 ~ 8 h的可检测光信号。
6. 叠氮化钠（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP标记的探针或者抗体应避免使用NaN3。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
实验流程
1. 使用合适的方法进行Western Blot实验，直至用PBST/PBS或TBST/TBS洗涤二抗。
2. 配制ECL工作液：ECL Femto化学发光液A液与ECL Femto化学发光液B液按照1:1混合后即为ECL工作液。ECL工作液使用量大约为10 ~ 100 µL/cm2膜或根据个人实验习惯使用。工作液宜在临检测前配制。
注：暴露于日光或其他强光下可能损害工作液，因此请注意将工作液避光保存。实验室的常见照明不会损害工作液。
3. 用WB专用平头镊夹住边缘将印记膜从洗涤缓冲液中取出，置于胶片暗盒中，蛋白面朝上，滴加ECL工作液至印记膜被全部覆盖，室温孵育5 min。
4. 从工作液中取出印记膜，并置于一个塑料片或清洁的塑料纸(膜)中，用一张吸水纸吸除多余的液体，并从印记膜和塑料纸之间小心地压出气泡。蛋白面朝上，即可进行压片检测或化学发光成像仪检测。
注：将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60 s。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5 ~ 30 min期间是强烈的。印迹条带能够持续输出6 ~ 8 h的可检测光信号，但强度会随时间下降，若底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备（如Bio-Rad的分子成像仪系统）或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。
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