- 产品参数
- 产品货号： LJ002
- 产品规格： 100 mL
- 品牌： belongbio
产品信息
产品概述
SDS细胞裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液，通过阴离子去垢剂SDS促进细胞膜的崩解，特别适用于膜蛋白或者细胞骨架蛋白等难溶蛋白的溶解，有利于膜蛋白，胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。本产品具有有强烈的蛋白变性作用，不能用于非变性蛋白方面的研究。本产品裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、染色质免疫共沉淀 (chromatinimmunoprecipitation，ChIP)等。
储存条件
≤0℃运输。裂解液4℃保存，其余-20℃保存，有效期一年。
实验流程
(一) 培养细胞样品
1. 融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2. 细胞裂解对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。 按照6孔板每孔加入150 ~ 250 µL裂解液的比例加入装解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1 ~ 2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在水浴上继续裂解10 min。
3. 细胞裂解对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150 ~ 250 µL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必须分装成50 ~ 100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在水浴上继续裂解10 min。具体SDS细胞裂解液的使用量可参照表1。
4. 充分裂解后，1000 ~ 14000 rpm离心3 ~ 5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
(二) 组织样品
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解SDS细胞裂解液，混匀。取源当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
3. 按照每20 mg组织加入150 ~ 250 µL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。具体SDS细胞裂解液的用量参照表1。
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在水浴上继续裂解10 min。
5. 充分裂解后，10000 ~ 14000 rpm 离心3 ~ 5 min ，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 用SDS细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白浓度。
3. 通常6孔板每孔细胞加入150 µL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 µL或250 µL。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200 µL裂解液。
4. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清， 用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
表1.SDS细胞裂解液的使用量
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