- 产品参数
- 产品货号： LJ003
- 产品规格： 100mL
- 品牌： belongbio
产品信息
产品概述
Western及IP裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用，有利于胞浆蛋白、 核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于PAGE，Western，免疫沉淀（immunol precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）。
储存条件
≤0℃运输。裂解液 4℃保存，其余-20℃保存，有效期一年。
实验流程
(一) 对于培养细胞样品
1. 融解Western及IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2. 细胞裂解
(1)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入 150 ~ 250 µL裂解液的比例加入装解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1 ~ 2秒后，细胞就会被裂解。
(2)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 ~ 250 µL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50 ~ 100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。具体Western/IP裂解液的使用量 可参照表1。
3. 充分裂解后，1000 ~ 14000 rpm离心3 ~ 5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二) 对于组织样品
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取源当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ,使PMSF的最终浓度为1 mM。
3. 按照每20 mg组织加入100 ~ 200 µL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。具体Western/IP裂解液的用量参照表1。
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000 ~ 14000 rpm离心3 ~ 5 min ，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度。
3. 通常6孔板每孔细胞加入100 µL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150 µL或200 µL。通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
表1. Western/IP细胞裂解液的使用量
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