Caspase 1 活细胞凋亡检测试剂盒（绿色）（DW005）
- 产品货号： DW005
- 产品规格： 1 via l / 100 mL / 100 µL / 100 µL
- 品牌： belongbio
- 产品参数
- 产品货号： DW005
- 产品规格： 1 via l / 100 mL / 100 µL / 100 µL
- 品牌： belongbio
产品信息
产品概述
活细胞凋亡检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞，半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。Caspase-1主要参与促炎细胞因子的激活和细胞凋亡过程。已经证明胱天蛋白酶1对肽序列Tyr-ValAla-Asp（YVAD）具有底物选择性。该试剂盒使用FAM-YVAD-FMK作为半胱天冬酶1活性的荧光指示剂。FAM-YVAD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的半胱天冬酶1。一旦与半胱天冬酶1结合，荧光试剂保留在细胞内。结合抑制胱天蛋白酶1但不会阻止细胞凋亡的进行，有多种参数可用于监测细胞凋亡。本试剂盒旨在通过测量活细胞中的Caspase-1活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1活性，或用于筛选半胱天冬酶1抑制剂。绿色标记试剂FAM-YVAD-FMK允许通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1。本试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。
储存条件
≤0℃运输，-20℃保存。有效期一年。
注意事项
1. 为了您的健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。本产品仅作科研用途。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
实验流程
1. 用密度为5×105 ~ 2×106个细胞/mL的测试化合物制备细胞。
2. 将FAM-YVAD-FMK以1：150的比例加入到细胞溶液中。
3. 在室温下孵育1 h。
4. 将细胞沉淀，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞。
5. 在Ex/Em =490/525 nm处分析细胞。
【注】：使用前将所有部件在室温下解冻。
具体操作
1. 根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2×106个细胞/mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。
2. 通过向FAM-WVAD-FMK（DW005-A）的小瓶中加入50 µL DMSO，制备150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。
3. 将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液以1:150的比例添加到细胞溶液中，并将细胞在37℃，5%CO₂培养箱中孵育1 h。
注1：对于FAM-WVAD-FMK标记，细胞可以浓缩至5×106个细胞/mL。未使用的150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。
注2：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用FAM-WVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
4. 将细胞以约200 g旋转5 min，并用1 mL洗涤缓冲液（DW005-B）洗涤细胞2次。将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1：FAM-WVAD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2 ~ 5×106个细胞/100 μL，等分试样，用于荧光检测。
5. 若有需要，用DNA染色标记细胞（如用于死细胞的碘化丙锭，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。
6. 通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex/Em=490/525 nm处检测荧光强度（对于碘化丙锭，Ex/Em =535/635 nm；对于Hoechst染料，Ex/Em =350/461 nm）。
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