- 产品参数
- 产品货号： DW006
- 产品规格： 200 T
- 品牌： belongbio
产品信息
产品概述
Caspase 3&7活性细胞凋亡检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是通过测量Caspase 3/7的活性而用于细胞凋亡检测的。因为Caspase3 （CPP32/apopain）在细胞凋亡的起始过程中发挥着重要作用，因此其作为一个值得信赖的细胞凋亡指示剂广泛地被大家所接受。Caspase 3具有特异性的底物多肽识别序列，即天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸（DEVD）。本试剂盒用Z-DEVD-Rh110-DVED-Z作为Caspase-3活性的荧光指示剂。通过Caspase 3作用，断裂Rh 110多肽，产生具有强烈绿色荧光的Rh 110，检测其在520 ~ 530 nm处的荧光强度，其激发光波长在340 ~ 350 nm处。 本试剂盒提供所有必需组分和最佳检测方案。本检测法强大、稳定，能够用于多种荧光研究平台的高通量分析中，例如微孔板分析， 免疫组化和流式细胞术。使用时96孔板时，每孔用100 ul试剂，本试剂盒提供的试剂足够进行200次检测；用384微孔板时，每孔加25 µL试剂，本试剂盒提供的试剂足够进行800次检测。
储存条件
≤0℃运输，-20℃保存。有效期一年。
注意事项
1. 为了您的健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。本产品仅作科研用途。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
实验流程
1. 用测试化合物（100 µL/孔/96 孔板或25 µL/孔/384孔板）物制备细胞。
2. 加入等体积的Caspase 3&7工作溶液。
3. 在室温下孵育1 h。
4. 监测Ex/Em =490/525 nm处的荧光强度（截止=515 nm）。
5. 将50 µL Caspase3&7底物（DW006-A）加入10 mL Assay Buffer（DW006-B）中并充分混合以制备Caspase 3&7工作溶液。
具体操作
1. 通过将10 μL/孔的10×测试化合物（96孔板）或5 μL/孔的5×测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。
2. 将细胞板在37℃，5%CO₂，培养箱中孵育所需的一段时间（对于用喜树碱处理的Jurkat细胞，4 ~ 6 h）以诱导细胞凋亡。
3. 加100 µL/孔（96孔板）或25 µL/孔（384孔板）的Caspase 3&7工作溶液。
4. 将板在室温下孵育至少1h，避光。
注：如果需要，在室温下加入Caspase 3&7工作溶液10 min后，将1 μL 1mM AC-DEVD-CHO Caspase 3&7抑制剂加入到选定的样品中，以确认抑制半胱天冬酶3/7样活动。
5. 以800 rpm离心细胞板（特别是对于非贴壁细胞）2 min（制动关闭）。
6. 用荧光酶标仪在Ex/Em=490/52 5nm（截止=515 nm）处检测荧光强度。
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