- 产品参数
- 产品货号： ZR004
- 产品规格： 5mL / 50mL / 500mL
- 品牌： belongbio
产品信息
产品描述
Trans细胞转染试剂是一种高性能阳离子聚合物转染试剂，其转染原理是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞，适用于贴壁或悬浮的多种细胞的质粒DNA转染。
储存条件
4℃保存，冰袋运输，有效期一年。
实验流程
1. 细胞接种
在转染前18 ~ 24 h进行铺板(不含抗生素)，使其在转染时的密度大约在80%左右。（培养液中的血清不影响转染效率。转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量）。
2. 准备Trans/DNA复合物
1）对每孔细胞，将1 μg质粒DNA稀释到40 μL无血清高糖DMEM培养基（或OPTI-MEMI培养基），混匀。
2）对每孔细胞，将3 μL Trans Plus转染试剂稀释到40 μL无血清高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEMI培养基），轻轻混匀。
3）将稀释后的Trans转染试剂全部加入到稀释后的质粒DNA中，轻轻摇匀，室温孵育10 ~15min。
注：形成的Trans/DNA复合物不可久置，请尽量在30 min内使用。
3. 转染
1）将上述80 μL Trans/DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡，让Trans/DNA复合物分散均匀。
2）在37℃，5% CO2培养箱培养6 ~ 18 h，去除含Trans/DNA复合物的培养液，更换新的培养液，继续培养至对转入基因表达分析。
注：筛选稳定转染细胞株，转染细胞24 h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上）。在37℃，5% CO2培养箱中孵育24 h，加入筛选培养基。在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下，约1 ~ 2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
附：试剂用量参考
表：不同培养体积对应的待转DNA、Trans、稀释液用量
注意事项
1. 细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保细胞没被细菌、真菌或支原体污染。因细胞密度随细胞系不同会有很大差别，且细胞密度直接决定转染效率。因此请在转染过程中尽量保持同样的接种比例，以提高实验重复性。
2. 质粒质量：请务必使用高纯度无内毒素转染级质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度，260 nm/280 nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8 ~ 2.0的范围之内）。如有可能，可琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
3. 制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，以避免反应体系中存在血清而干扰Trans/DNA复合物的形成。
4. 为了您的健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。本产品仅作科研用途。
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