- 产品参数
- 产品货号： DW017
- 产品规格： 0.5 mg / 1 mg
- 品牌： Belongbio
产品信息
产品概述
脂质过氧化是脂类的氧化降解过程，其主要由活性氧类（ROS）引发。脂质过氧化传感器（Lipid Peroxidation Sensor）是通过一种C11-BODIPY 581/591试剂的氧化来检测活细胞中的脂质过氧化情况。C11BODIPY 581/591本质上是一种亲脂荧光染料，具有良好的光稳定性、低荧光伪影特质，能积累在膜内。一旦染料的多不饱和丁间二烯基被氧化，荧光最大发射波长峰值从约590 nm偏移至约510 nm，活细胞的荧光从红色变为绿色，但仍维持亲脂性，从而反映膜的脂质过氧化水平。这种传感器通常用于荧光显微镜和流式细胞分析中，可视化监测脂质ROS的生成和动态变化。
储存条件
-20℃避光保存，≤0℃运输，有效期三年。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 使用前小心离心数秒取用，需佩戴手套操作，注意避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。
3. 本试剂盒可用于检测活细胞中Lipid ROS水平，用于评价细胞铁死亡状态。
使用方法
（一）样品溶解
商品开封后，离心机轻甩；随后加入适量DMSO进行溶解，溶解度至少可达25 mg/mL。溶解后建议分装-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，防止吸潮。
【注】：样品轻甩目的是为了避免痕量的探针吸附管壁损失样本。
（二）样品使用
1. 流式细胞分析：
（1）悬浮细胞：800 g离心5 min收集细胞沉淀；随后PBS洗涤细胞两遍。
（2）贴壁细胞：弃培养液，用常温PBS或培养液清洗细胞2次，随后胰酶消化，800 g离心5 min收集细胞沉淀，随后PBS洗涤细胞两遍，每个样本收集1 ~ 5×105个细胞。
【注】：操作过程中轻柔吹打细胞，消化时间不宜过长，剧烈吹打或胰酶消化过度会影响实验结果。
（3）脂质过氧化传感器用于脂质过氧化检测的推荐浓度为5 µM；配制方法：用新鲜空白培养液配制终浓度为5 µM的脂质过氧化传感器染色液待用，DMSO含量≤5%。
【注】：该步骤操作建议在消化细胞前准备好，以免细胞消化后久置影响实验结果。
（4）将事先配制好的脂质过氧化染色液加入收集的细胞沉淀中，推荐体积为500 µL，随后置于37℃孵箱，染色30 min，期间5 ~ 10 min间隔轻弹细胞使其悬浮保证染色更充分。
（5）染色结束后，800 g离心5 min，弃上清，随后用PBS清洗细胞2次，加入200 µLPBS重悬细胞用于流式分析。
（三）原位成像
（1）接种适当密度的细胞于20 mm规格的盖玻片上（也可用共聚焦小皿代替）给予实验药物处理适当时间后，吸去培养液，用PBS洗涤细胞一遍；加入500 µL配置好的脂质过氧化染色液，于37℃染色30 min；配制方法参考流式分析中的染色液配制。
（2）弃培养液，PBS洗涤细胞两遍后于荧光显微镜或激光共聚焦下进行成像检测。细胞在染色后应在1 h之内完成检查。
【注】：配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。一个样品的染色液至少可以染色10万个细胞。若染色的样本细胞数量小于10万，也不建议降低染色液体积，确保染料充足，染色充分。
（四）检测条件
该分子探针在还原状态下最佳激发波长为581 nm，发射为591 nm；被Lipid ROS氧化后最佳激发波长为500 nm，发射在510 nm。因此，在流式分析中检测通道为FL1-A；激光共聚焦检测：氧化态激发波长可选488 nm（FITC）通道；还原态激发波长可选561 nm（TRITC）通道。
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