- 产品参数
- 产品货号： ZYT001
- 产品规格： 50 rxns
- 品牌： belongbio
产品信息
产品概述
Quick Cell 支原体快速检测试剂盒（细胞培养专用）是针对细胞培养液中支原体污染快速检测试剂，相比传统的PCR检测法操作简单，反应时间短，只需吸取1 μL细胞培养上清至反应体系中，60℃孵育1 h即可进行结果判定。本产品检测范围广，可检测多种支原体：（1）Mycoplasma.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3）M.Arginini、（4）M.hominis、（5）M.orale、（6）M.salivarium、（7）M.pirum、（8）Acholeplasma Laidlawii、（9）M.agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M,arthritidis、（13）M.pulmonis等。以上13种支原体约占细胞支原体污染的99%以上，包括细胞培养过程中常见的8种。本品不适用于脲解支原体、肺炎支原体的检测。
储存条件
-20℃避光保存。≤0℃运输，有效期一年。
产品特点
1. 灵敏度高：最低检测范围可达10 ~ 200 copies/μL。
2. 快速：60 min即可完成检测，检测速度比传统的PCR法快3倍，且无需电泳，肉眼即可观察结果。
注意事项
1. 请确保实验操作的规范性，佩戴好口罩和手套，防止人为带入支原体，造成假阳性。
2. 若为低温保存的血浆、血清、脐带血、胰酶、抗生素、未使用的培养液等支原体含量较低的待测样品，为了保证支原体DNA的检出率，可通过离心浓缩提高样品DNA浓度，再进行检测。
3. 若反应后，发现个别样品的颜色介于阳性和阴性之间（正常这种情况应该概率很低，如果经常出现，样品中可能含有可干扰正常指示效果的物质，必须先去除），可以将这些样品继续61℃反应10 min。如果其颜色仍然与阳性对照的颜色不同，该样品应该判为阴性。
4. 本产品仅限于科学研究试用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
实验流程
（一）样品准备
待测的细胞培养液样品最好来源于至少培养3d且汇合度70-90%左右的细胞培养上清(贴壁细胞)。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后，至少让细胞生长3 d再取培养液进行检测，哺乳动物细胞的存在不会影响检测结果。细胞培养上清可直接用于检测，但样品中如果含有EDTA等影响支原体 DNA扩增的成分，建议进行样品处理：
1） 根据浓缩倍数，取100 ~ 1500 μL待测样品到1.5 mL离心管内，1000 rpm离心5 min，将离心后的上清转移到另一个离心管内，丢弃细胞沉淀。
2）将上清于13000 rpm离心5 min，小心吸去上清后，使用50 μL 5 mM Tris-HCl（pH8.5）或去离子水重悬沉淀。
3）重悬后的样品可以直接进行检测，也可以进行热处理后再检测（热处理可以使样品保存更加稳定）。热处理方法：样品于95℃加热5 min后，1000 g离心5 s，取上清进行检测。准备好的样品若不立即进行检测，请置于-20或-80℃保存，不得放置于室温或4℃。
（二）反应体系配制
1） Reagent Ⅰ和Reagent Ⅲ从冰箱取出后，室温解冻（使用前请于1000 rpm离心30 s）。Reagent Ⅱ从冰箱取出后置于冰上备用。
注：Reagent Ⅰ和 Reagent Ⅲ使用前请于1000 rpm离心30 s。Reagent Ⅱ不得置于室温。
表1 恒温反应体系配置
注：为防止移液误差，多个样品时建议总体积多配制6%（若觉得该比例不合适，可自己调整）。
2）将上一步配制好的恒温反应体系吹打混匀后，按照每管23 μL分装至0.2 mL PCR管中（请使用透明度良好的PCR管）。
3）向准备好的测试管中加入2 μL待测样品。阴性对照管中可以加入2 μL无菌水，阳性对照管中加入2 μL Positive Control。反应液的总体积为25 μL。
4）将样品放入PCR仪或水浴锅反应：61℃，60 min。若使用水浴锅进行加热，请保证显示温度与实际温差不超过0.5℃，另须向每个反应管内加入 25 μL矿物油，以防止水分挥发。
（三）结果判断
61℃反应60 min 后，立即取出反应管，置于室温。选择白色背景，观察溶液的颜色变化。若溶液为蓝绿色，则说明有支原体污染；若为紫红色，则没有支原体污染（若反应60 min 后，阳性对照效果不明显，可继续反应10 min）。
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