本制品包含新一代逆转录酶REALscript H-RTase，具有较高的热稳定性和反转录效率，适用于cDNA合成后的两步法RT-PCR检测。RNA中残留的基因组DNA（gDNA）可作为PCR反应的模板被扩增，易导致实验结果的假阳性，试剂盒中含有的新型dsDNase，能够特异性去除双链DNA，而不消化RNA样品、逆转录引物及合成的cDNA，并且具有热敏感性，可在55℃快速不可逆失活，实现去除基因组污染与逆转录反应的同步进行。逆转录产物兼容染料法与探针法qPCR。本制品广泛适用于动物、植物以及微生物RNA的逆转录反应。

产品货号： RM001
产品规格： 100 rxns/20 µL / 200 rxns/20 µL
品牌： belongbio

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产品参数

产品货号： RM001
产品规格： 100 rxns/20 µL / 200 rxns/20 µL
品牌： belongbio

产品信息

*1：包含REALscript H-RTase、Ribonuclease Inhibitor和dsDNase。

*2：包含Buffer、dNTPs、Oligo dT/Random Primer Mix。

产品概述

储存条件

-30 ~ -15℃避光保存，≤0℃运输，有效期12个月。

产品优势

1. 本产品中的底物与酶均以预混液形式呈现，减少了实验步骤，简单方便。

2. 本产品转录的RNA产量较高，每个反应体系可获得100 ~ 200 μg的高质量RNA。

产品特点

1. 高热稳定性，反应温度45-60℃，有助于RNA二级结构打开。

2. 抑制剂耐受能力强，合成cDNA更稳定。

3. 优化的Random primers、Oligo dT Primer配比，充分保障反转录效率，以保证qPCR结果的真实性和可重复性。

注意事项

1. 实验时请佩戴一次性手套及口罩，规范操作。

2. 本品为由RNA制备cDNA的反转录试剂，在提取RNA和反转录过程中要严防RNase污染。建议佩戴好手套和口罩，使用无RNase污染的实验耗材等。

实验流程

1. 反应体系（推荐冰上配置）

注：

1）模板RNA、REAL RT Enzyme Mix、5×REAL RT Reaction Mix在冰上解冻，建议先将除RNA外试剂配制成预混液，混匀，再加入RNA模板。

2）Total RNA 建议不超过2 μg，mRNA 不超过200 ng (20 μL体系）。

3）REAL RT Enzyme Mix、5×REAL RT Reaction Mix含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外，请点甩离心后使用，并避免吸头外壁沾附损失。

2.反应程序

注：

1）cDNA产物可直接用于qPCR反应。若不立即使用，建议-20℃或-80℃保存，请避免反复冻融。

定量PCR反应

上一步获得的cDNA产物可直接用于后续的定量RCR反应（cDNA使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10）。若荧光信号值不理想，建议对cDNA原液进行5 ~ 10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20 ~ 30个循环为好。可搭配使用本公司的2×Universal SYBR Green qPCR Master Mix（QM001）进行高性能基因表达分析。

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