T7 RNA Transcription Kit（SJ001）
T7 RNA转录试剂盒是T7 RNA Polymerase以带有T7启动子的DNA为模板，四种NTP为底物，在较短的时间体外转录合成RNA。每个标准反应以1 μg对照模板可产生60 ~120 μg的RNA。每个试剂盒可产生高达6 mg的RNA。
- 产品货号： SJ001
- 产品规格： 50T / 100T
- 品牌： belongbio
- 产品参数
- 产品货号： SJ001
- 产品规格： 50T / 100T
- 品牌： belongbio
产品信息
注：Control Template为400bp双端含有T7启动子序列的DNA片段，浓度为0.5 μg/μL。
产品描述
T7 RNA转录试剂盒是T7 RNA Polymerase以带有T7启动子的DNA为模板，四种NTP为底物，在较短的时间体外转录合成RNA。每个标准反应以1 μg对照模板可产生60 ~120 μg的RNA。每个试剂盒可产生高达6 mg的RNA。
产品用途
1. 合成单链RNA，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA的前体。
2. 合成dsRNA。
3. 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。
4. 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。
储存条件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
注意事项
1. 实验时佩戴一次性手套及口罩，规范操作；
2. 使用RNase-free的实验耗材，防止产物被RNase降解；
3. 转录模板需要纯化，并确保条带单一。
反应体系
1. 制备以下反应混合物；
2. 将反应溶液轻轻混合均匀，并于37℃反应2 ~ 8小时。
注意：若合成的是dsRNA，37℃反应结束后，请于72℃条件下孵育10 min，再于室温条件下放置20 min，以退火形成dsRNA。
3. 在反应体系中加入1 μL的DNase I（2U/μL），37℃孵育15 min，去除DNA模板。（可选）
注意：相对于产物RNA，模板DNA的含量非常低，一般不用去除，也可以用DNase I消化。
4. 合成的RNA经电泳分析、纯化后，可用于下游实验。
产物纯化
1. 磁珠纯化：泊朗生物RNA纯化试剂盒（磁珠法）（PU002），能够在30分钟内获得高纯度dsRNA。在有效去除游离核苷酸、蛋白质等杂质的同时，减少实验过程中有机试剂的使用。
2. 苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀：加入等体积苯酚/氯仿混合物抽提；再用氯仿抽提两次；用两倍体积的无水乙醇沉淀RNA；用70%乙醇洗涤RNA沉淀两次；用Nuclease-free Water重悬沉淀、溶解RNA。
3. 色谱柱法：色谱柱可以去除非结合核苷酸、蛋白及盐分。如果产物超过柱子结合能力，则需要额外色谱柱。
dsRNA定量
紫外吸收法：RNA浓度可以通过260 nm处吸光度值进行测量。游离核苷酸会影响定量的准确性，采用此方法前请先进行RNA纯化。
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