高产量T7 Fluorescein RNA转录试剂盒是专门用于体外转录中产生随机Fluorescein修饰RNA的试剂盒,本试剂盒通过优化的反应缓冲液和T7 RNA聚合酶可将Fluorescein-12-UTP有效地结合到RNA中,代替其天然对应物UTP,所得到的Fluorescein修饰的RNA可通过荧光光谱法检测。每个标准反应以1 µg对照模板可产生60 ~120 µg Fluorescein修饰的RNA,每个试剂盒可产生高达2.4 mg Fluorescein修饰的RNA。
产品信息

注:Control Template 为 400 bp 双端含有 T7 启动子序列的 DNA 片段,浓度为 0.5 µg/µL。
产品概述
高产量T7 Fluorescein RNA转录试剂盒是专门用于体外转录中产生随机Fluorescein修饰RNA的试剂盒,本试剂盒通过优化的反应缓冲液和T7 RNA聚合酶可将Fluorescein-12-UTP有效地结合到RNA中,代替其天然对应物UTP,所得到的Fluorescein修饰的RNA可通过荧光光谱法检测。每个标准反应以1 µg对照模板可产生60 ~120 µg Fluorescein修饰的RNA,每个试剂盒可产生高达2.4 mg Fluorescein修饰的RNA。
储存条件
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。
注意事项
1. 实验时佩戴一次性手套及口罩,规范操作;
2. 使用RNase-free的实验耗材,防止产物被RNase降解;
3. 转录模版需要纯化,并确保条带单一。
反应体系
1. 制备以下反应混合物;

2. 将反应溶液轻轻混合均匀,并于避光条件下37℃反应2 ~ 8小时。
注意:若合成的是dsRNA,37℃反应结束后,请于避光条件下72℃孵育10 min,再于室温条件下放置20 min,以退火形成Fluorescein修饰的dsRNA。
3. 在反应体系中加入1 µL 的 DNase I(2 U/µL),37℃孵育15 min,去除DNA模板。(可选)
注意:相对于产物RNA,模板DNA的含量非常低,一般不用去除,也可以用DNase I消化。
4. 合成的Fluorescein修饰的RNA经电泳分析、纯化后,可用于下游实验。
产物纯化
1. 磁珠纯化:泊朗生物dsRNA纯化试剂盒(磁珠法)(PU002),能够在30分钟内获得高纯度dsRNA。在有效去除游离核苷酸、蛋白质等杂质的同时,能减少实验过程中有机试剂的使用。
2. 苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀:加入等体积苯酚/氯仿混合物抽提;再用氯仿抽提两次;用两倍体积的无水乙醇沉淀RNA;用70%乙醇洗涤RNA沉淀两次;用Nuclease-free Water重悬沉淀、溶解RNA。
3. 色谱柱法:色谱柱可以去除非结合核苷酸、蛋白及盐分。如果产物超过柱子结合能力,则需要额外色谱柱。
dsRNA定量
紫外吸收法:Fluorescein修饰的RNA浓度可以通过260 nm处吸光度值进行测量。游离核苷酸会影响定量的准确性,采用此方法前请先进行RNA纯化。


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