HighYield T7 RNA Transcription Kit（SJ002）
高产量T7 RNA转录试剂盒是T7 RNA Polymerase以带有T7启动子的DNA为模板，四种NTP为底物，在较短的时间体外转录合成RNA。本试剂盒在ZS-SJ001的基础上调整了组分和反应配比，在2小时内，每个标准反应以1 μg对照模板可产生60 ~ 120 μg的RNA，提高了反应效率。
- 产品货号： SJ002
- 产品规格： 50 rxns
- 品牌： belongbio
- 产品参数
- 产品货号： SJ002
- 产品规格： 50 rxns
- 品牌： belongbio
产品信息
注：Control Template为400 bp双端含有T7启动子序列的DNA片段，浓度为0.5 μg/μL。
产品描述
高产量T7 RNA转录试剂盒是T7 RNA Polymerase以带有T7启动子的DNA为模版，四种NTP为底物，在较短的时间体外转录合成RNA。本试剂盒在SJ001的基础上调整了组分和反应配比，在2小时内，每个标准反应以1 μg对照模板可产生60 ~120 μg的RNA，提高了反应效率。
产品用途
1. 合成单链RNA，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA的前体。
2. 合成dsRNA。
3. 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。
4. 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。
储存条件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
注意事项
1. 实验时佩戴一次性手套及口罩，规范操作；
2. 使用RNase-free的实验耗材，防止产物被RNase降解；
3. 转录模版需要纯化，并确保条带单一。
反应体系
1. 制备以下反应混合物；
2. 将反应溶液轻轻混合均匀，并于37℃孵育2 ~ 8小时；
3. 对于结构复杂或长度较长的合成模版（> 800 bp），37℃反应结束后，可72℃孵育10 min，再自然冷却退火形成dsRNA；
4. 可以加入一定量的DNase I去除DNA，加入RNase T1去除ssRNA；
3. 取1 µL反应产物，用琼脂糖凝胶电泳检测转录产物合成情况。
产物纯化
1. 磁珠纯化：dsRNA纯化试剂盒（磁珠法）（PU002），能够在30分钟内获得高纯度dsRNA。在有效去除游离核苷酸、蛋白质等杂质的同时，减少实验过程中有机试剂的使用；
2. 苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀：加入等体积苯酚/氯仿混合物抽提；再用氯仿抽提两次；用两倍体积的无水乙醇沉淀dsRNA；用70%乙醇洗涤dsRNA沉淀两次；用Nuclease-free Water重悬沉淀、溶解dsRNA；
3. 色谱柱法：色谱柱可以去除非结合核苷酸、蛋白及盐分。如果产物超过柱子结合能力，则需要额外色谱柱。
dsRNA定量
1. 紫外吸收法：dsRNA浓度可以通过260 nm处吸光度值进行测量。游离核苷酸会影响定量的准确性，采用此方法前请先进行dsRNA纯化；
2. 染料法：用RiboGreen染料进行dsRNA定量。游离核苷酸不会影响定量，可以对纯化或者未纯化的反应产物中的dsRNA进行准确定量。
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