- 产品参数
- 产品货号： DW003
- 产品规格： 100 rxns
- 品牌： belongbio
产品信息
产品概述
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是联合使用FITC标记的Annexin V和PI来检测细胞凋亡的发生，可区分早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞或坏死细胞。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）高亲和力结合。在正常的活细胞中，PS位于细胞膜内侧，但在早期凋亡细胞中，PS从细胞膜内侧翻转至细胞膜外侧。因此使用带黄绿色荧光的FITC标记Annexin-Ⅴ，即Annexin V-FITC，便可通过流式细胞仪或荧光显微镜检测到这一生理特征。碘化丙啶染色液（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料， 不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞同时被FITC和PI结合染色而呈现双阳性。呈现红色荧光。
储存条件
4℃保存，≤0℃运输。有效期一年。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验流程
（一）流式
1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。建议除设置未处理的细胞样品作为阴性对照外，额外设定样品进行Annexin V-FITC或PI单染，用于调节补偿。
2. 将样品于4℃，300 ×g离心5 min，弃去上清，收集细胞。若为贴壁细胞，请预先使用不含EDTA的胰酶进行消化，但消化时间不宜过长，以免引起假阳性。
3. 使用预冷的PBS洗涤细胞两次，每次均需4℃，300 ×g离心5 min。收集1 ~ 5×105细胞，并使用100 μL的1×Binding Buffer重悬细胞。
4. 加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，轻轻混匀。室温避光孵育10 ~ 15 min。
5. 孵育完毕后将样品转移至冰上，加入400 μL的1×Binding Buffer或PBS。建议在1 h内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
（二）荧光显微镜
1. 在载玻片上接种细胞，按照实验要求诱导细胞凋亡。实验应设置未经处理的细胞样品作为阴性对照。
2. 使用PBS洗涤细胞。
3. 每100 μL的结合缓冲液中加入5 ~ 25 μL的Annexin V-FITC和5 μL PI。
4. 将上步配制的染液加入培养板中，使细胞被全部覆盖。室温避光孵育15 ~ 30 min（为避免细胞凋亡进行，孵育可转移至冰上进行，但孵育时间相应延长至30 min以上）。
5. 使用1×Binding Buffer洗涤细胞。
6. 载玻片上滴加1×Binding Buffer覆盖细胞后，用盖玻片盖上细胞。使用合适的滤光片在荧光显微镜下观察细胞。
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