产品信息

产品概述
高尔基体是大多数真核细胞胞质内囊泡和折叠膜的复合体,参与分泌和细胞内运输。它修饰内质网(ER)中内置的蛋白质和脂质,并准备将其输出到细胞外。它还在脂质在整个细胞中的运输和溶酶体的形成中起着重要作用。Smart Cell NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒提供了一种简便,快速的方法,可以选择性地对活细胞或醛固定细胞中的高尔基染色。将C6 NBD神经酰胺与牛血清白蛋白(C6-NBD-Ceramide-BSA)形成复合物给予细胞。高尔基体通过形成相应的荧光代谢产物而被染色。
储存条件
≤0℃运输。-20℃避光保存,有效期一年。
使用方法
(一)简要概述
1. 根据需要处理细胞。
2. 加入C6 NBD神经酰胺工作溶液,在室温或37℃下孵育15 ~ 30 min。
3. 更换染色缓冲液,在室温或37℃下孵育15 ~ 30 min。
4. 使用FITC滤镜套件在显微镜下观察。
5. 可选:用4%甲醛固定细胞。
(二)溶液配制
1. 储备溶液配制
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20℃,避免反复冻融循环。C6 NBD神经酰胺储备溶液(100×):将100 µL的DMSO(组分C)加入小瓶C6 NBD神经酰胺(组分A)中并充分混合。
【注】:未使用的C6 NBD神经酰胺原液在-20℃保存,避免冻融循环。
2. 工作溶液配制
C6 NBD神经酰胺工作溶液:将10 µL的NBD神经酰胺原液(100×)添加到990 µL的染色缓冲液(组分B)中,制成C6 NBD神经酰胺工作溶液。
可选:将10 µL的Hoechst 33342(组分D)添加到1 mL的NBD神经酰胺工作溶液中以进行核染色。
(三)操作步骤
1. 根据需要处理细胞。
2. 直接在细胞培养基中加入100 µL的C6 NBD神经酰胺工作溶液。
3. 在室温或37℃下孵育15 ~ 30 min。
4. 除去C6 NBD神经酰胺工作溶液,并用100 µL /孔的染色缓冲液(组分B)代替。
5. 在室温或37℃下孵育15 ~ 30 min。
6. 在装有FITC滤光片的荧光显微镜下观察。
7. 从步骤4中除去染色缓冲液,然后向每个孔中添加100 µL/孔/96 孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。
【注】:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例:2×106 细胞/mL)的4%甲醛固定液。(可选)
8. 在室温下将平板孵育20 ~ 30 min,去除固定剂。用PBS洗涤细胞2 ~ 3次,然后用100 µL/孔的染色缓冲液(组分B)替换。(可选)
注意事项
本产品仅限于科学试验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

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