Trizol Free Reagent（免氯仿）（TR005）
- 产品货号： TR005
- 产品规格： Trizol Free Reagent（免氯仿）
- 品牌： 200 rxns / 400 rxns
- 产品参数
- 产品货号： TR005
- 产品规格： Trizol Free Reagent（免氯仿）
- 品牌： 200 rxns / 400 rxns
产品信息
产品概述
Trizol Free Reagent（免氯仿）适用于从各种动植物、细菌组织、细胞等样本中分离出高质量的Total RNA，且与传统Trizol提取方法相比，具有提取过程无需氯仿等有机试剂进行分层、提取全程可在室温下操作等优点，为不能使用氯仿且不具备低温操作条件的使用者提供了更为便利的选择。样品在Trizol Free Reagent（免氯仿）中得以充分被裂解，在加入Solution H离心后，会形成上清液和沉淀，RNA分布在上层溶液中，上清液经异丙醇沉淀便可以得到Total RNA，而蛋白质、多糖、细胞碎片和DNA等杂质沉淀到管底，可有效去除杂质，保证了提取的RNA完整性和纯度。通过本试剂盒提取获得的Total RNA纯度高，基本不含蛋白质及基因组DNA，可以直接用于Northern 杂交、mRNA 纯化、体外翻译、RT-PCR等各种分子生物学实验。
储存条件
2 ~ 8℃保存，避光保存。有效期12个月。
注意事项
1. 本产品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害。使用时应穿戴防护物，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
2. 请穿实验服并佩戴一次性手套操作，避免RNase污染。建议所有操作均在冰上进行。
3. 本产品仅作科研用途。
操作步骤
1. 样品处理
A. 贴壁细胞
（1）弃去培养液，用1×PBS清洗1次；
（2）每10 cm2培养面积积（常规6孔板每孔或直径3.5 cm平皿）的生长细胞中加入0.5 mL Trizol Free Reagent（免氯仿），轻微晃动，充分覆盖到细胞表面，使用移液枪反复吹打使细胞裂解；
（3）将含有细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀；
（4）室温静置5 min。
B. 悬浮细胞
（1）8,000xg、4℃离心2 min离心收集细胞；
（2）每5×106 ~ 1×107个细胞加入0.5 mL Trizol Free Reagent（免氯仿），用移液器反复吹打至裂解液中无明显沉淀；
（3）室温静置5 min。
C. 动、植物组织
（1）取新鲜组织立即用液氮速冻，迅速转移至液氮预冷的研钵中充分研磨，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显可见颗粒)；
（2）将研磨至粉末状的样品转移到离心管中每50 mg加入0.5 mL Trizol Free Reagent（免氯仿），匀浆处理；对于新鲜的组织样品，建议立即加入Trizol Free Reagent（免氯仿），充分匀浆；
（3）室温静置5 min；
（4）（可选）12,000xg室温离心5 min。小心吸取上清至新的1.5 mL离心管，切勿吸取沉淀。
注意：①若取样量过多会导致提取的RNA中有DNA污染。②若样本含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌纤维、植物块茎等，可离心去除不溶物质，RNA存在于上清中。提取脂肪含量较高的组织样本时，若上层含有大量油脂，应去除，转移上清进行后续操作。
1. 向上述裂解液中加入0.2 mL Solution H/0.5 mL TrizolFree Reagent，盖好管盖，涡旋振荡至溶液充分混匀，室温静置5 min；
2. 12,000xg室温离心15 min。此时样本中蛋白质、DNA、多糖等杂质沉淀到管底，RNA分布在上层溶液中，小心吸取上清溶液（约0.5 mL）至一个新的离心管中；
注意：可少取上清液，不要触碰到沉淀，吸到下层沉淀会导致基因组及杂质污染。
3. 在得到的上清溶液中加入等体积的异丙醇，上下颠倒混匀，室温放置10 min；
4. 12,000xg室温离心10 min，去上清，此时管底会出现白色胶状沉淀，即RNA沉淀；
5. 加入1 mL 75%乙醇（用RNase-free 水配制）洗涤沉淀。8,000xg室温离心3 min，弃去上清；
6. 重复步骤6一次；
7. 室温晾干5 ~ 10 min。加入适量的RNase-free水溶解沉淀，必要时可用移液器轻轻吹打或在55 ~ 60℃孵育5 ~ 10 min，待沉淀完全溶解后将所得到的RNA溶液置于-80℃保存或用于后续试验。
注意：不能使用真空离心机或加热的方法干燥RNA，过分干燥会使RNA难以溶解，导致OD260/OD280值偏低。
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