产品概述
本产品采用温和洗涤配方，可在不影响目的蛋白的情况下，去除结合在细胞爬片及冰冻切片上的一抗和二抗，完成细胞爬片及冰冻切片多重免疫荧光染色。

储存条件
4℃保存，≤0℃运输。有效期一年。

注意事项
为了您的健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

实验流程
1. 样品准备
1）石蜡切片：依次将切片放入二甲苯Ⅰ 15 min-二甲苯Ⅱ 15 min-无水乙醇Ⅰ 5 min-无水乙醇Ⅱ 5 min -95%乙醇5 min-85%乙醇5 min - 75%乙醇5 min，蒸馏水洗。
2）冷冻切片：冰冻切片固定10 ~ 30 min，PBS洗5 min，重复3次，滴加0.3% Triton-X100破膜液通透20 min，PBS洗5 min，重复3次。
3）细胞爬片或细胞涂片：细胞样本固定10 ~ 30 min，PBS洗5 min，重复3次，滴加0.3% Triton X-100破膜液通透20 min，PBS洗5 min，重复3次。
2. 抗原修复：组织切片置于盛满pH9.0 EDTA碱性抗原修复液或者pH6.0柠檬酸修复缓冲液的修复盒中，于微波炉内进行抗原修复，中火8 min，停火8 min，转中低火7 min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片（也可以用高压1 ~ 2 min；100℃水煮15 min；100℃水浴20 min等其他热修复方法）。自然冷却后将玻片置于PBS（pH7.4）中，在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。
注：修复液和修复条件根据组织类型以及抗原类型来确定，冰冻切片和细胞样本需要使用抗体洗脱液来进行抗体洗脱。
3. 阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%过氧化氢溶液，室温避光孵育15 min。将玻片置于PBS (pH7.4)中，在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。
4. 非特异性靶点封闭：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加封闭用正常山羊血清(或者其他封闭液，如3%BSA溶液)均匀覆盖组织，室温封闭30 min。
注：抗体稀释液中含有各种保护剂以及防腐剂，可以用来封闭或者稀释一抗，稀释后的一抗可以长期4℃保存（在常温下也可以保存一个月）。
5. 孵育一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗X，切片平放于避光湿盒内，4℃孵育过夜或者37℃孵育1 ~ 2 h(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)。
6. 孵育多聚HRP二抗：玻片置于PBS（pH7.4）中，在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的多聚HRP二抗覆盖组织，避光室温孵育50 min，PBS洗三次。
7. TSA荧光染料反应液反应：直接滴加50 μL即用型TYR-XXX荧光染料，TSA荧光染料反应液均匀覆盖组织，室温反应3 ~ 15 min(最佳时间5 min ~ 10 min)，PBS洗三次。
注：TSA+增强剂能够进一步增强荧光信号（放大5 ~ 10倍），可根据实际的荧光显色强度选择是否添加。使用比例为TSA+增强剂：TYR-XXX荧光染料=1：500。
8. 抗体洗脱：滴加适量37℃预热的抗体洗脱液覆盖样本，于37℃静置5 ~ 20 min，弃去洗脱液，再次滴加适量抗体洗脱液覆盖样本，37℃放置5 ~ 20 min，弃洗脱液，PBS洗三次，每次5 min。
9. 重复3 ~ 7步骤（换用另一种TYR-XXX荧光染，进行第二轮标记）。
10. DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI即用型染液，避光室温孵育5 min ~ 20 min。
11. 封片：玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
12. 镜检拍照：切片于荧光显微镜/共聚焦/多通道荧光扫描仪/多光谱成像系统下观察并采集图像。