- 产品参数
- 产品货号： PU010
- 产品规格： 50 rxns / 200 rxns
- 品牌： belongbio
产品信息
注：Buffer WS在使用前需添加60 mL（PU010-01）/120 mL（PU010-02）无水乙醇。
产品描述
本试剂盒是一种用于从DNA琼脂糖凝胶中回收目的DNA的试剂盒。本试剂盒中的硅基质离子交换柱可以有选择性地吸附核酸分子，去除其他杂质，从而获得高质量的DNA回收产物。所获得的DNA可以直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。
产品特点
1. 适用范围广，回收效率高。
2. 溶胶速度快，操作便捷高效，15 min即可完成DNA回收操作。
储存条件
室温保存，有效期12个月。
自备试剂
小型高速离心机，乙醇。
图.胶回收原理示意图
使用方法
注意：第一次使用前，请在Buffer WS中加入指定量无水乙醇，并在瓶上做好标记。
1. 在长波紫外灯照射下将目的条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量去除多余的琼脂糖凝胶），称重后放入干净的EP管中；
2. 加入3倍体积Buffer GM（如胶块重量为100 mg，加入溶胶液300 μL）后，使用65℃水浴或金属浴孵育5 ~ 10 min，期间颠倒几次以加速胶块溶解；
3. 胶块完全溶解后，将该溶液转移至纯化柱中，12000 rpm离心1 min，倒弃收集管内液体，将吸附柱重新放回收集管中；若溶液体积较大，超出纯化柱容纳量，可分几次加入到离心柱中进行离心处理；
4. 向纯化柱中加入300 μL Buffer GM，12000 rpm离心1 min，倒弃收集管内液体，将吸附柱重新放回收集管中；
5. 向纯化柱中加入700 μL Buffer WS，12000 rpm离心1 min，倒弃收集管内液体，将吸附柱重新放回收集管中；
6. 重复步骤5一次；
7. 将空纯化柱和收集管于12000 rpm离心2 min，纯化柱敞口于室温下放置2 min，使纯化柱中残留液体完全挥发；
8. 将纯化柱转移至新的洁净EP中，向吸附膜中央悬空滴加30 ~ 50 μL Nuclease-free Water，静置1 min，12000 rpm离心1 min。若想增加质粒的回收效率，可重复一次洗脱步骤；
9. 弃去纯化柱，所得液体即为纯化产物，可直接用于下一步试验，或者-20℃储存。
注意事项
1. 第一次使用时请在Buffer WS中加入无水乙醇，并在瓶上做好标记；
2. 为避免溶剂长时间暴露于空气中发生挥发、pH值变化等，请在使用后及时盖紧盖子；
3. 溶胶液在低温下可能会有沉淀，请在使用前将其加热37℃溶解即可；
4. 溶胶液放置过久pH升高，或样品中碱性物质太多，会使回收率降低，可在溶胶液中加入加5 ~ 10 μL 3 M醋酸钠（pH5.2），将pH值调到5 ~ 7；
5. 回收纯化的DNA片段一般在100 bp至10 kb，片段过大或过小都不利于回收。若有需要，请在胶块溶解后添加适量异丙醇或选择适宜洗脱温度，以提高回收效率；
6. 为保证回收效率，电泳时请尽量避免电泳液过热，切胶时尽量减少紫外照射时间，以减少对DNA的损伤，并尽可能割除不含DNA的凝胶部分；
7. 为保证您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩进行操作。
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