- 产品参数
- 产品货号： PU006
- 产品规格： 20 T / 200 T
- 品牌： belongbio
产品信息
特别注意：
PU006-01：Fixation Buffer在使用前请加入7.5 mL的无水乙醇，混合均匀后短期室温保存，长期保存建议置于2 ~ 8℃。
Lysis Buffer A液常温保存，Lysis Buffer B液2 ～ 8℃保存。
Wash Buffer在使用前请加入6.4 mL的无水乙醇，混合均匀后可室温保存。
PU006-02：Fixation Buffer在使用前请加入75 mL的无水乙醇，混合均匀后短期室温保存，长期保存建议置于2 ~ 8℃。
Lysis Buffer A液常温保存，Lysis Buffer B液2 ～ 8℃保存。
Wash Buffer在使用前请加入64 mL的无水乙醇，混合均匀后可室温保存。
产品概述
本试剂盒是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，可以从大肠杆菌HT115诱导表达的菌液中提取并纯化dsRNA的试剂盒，本试剂盒利用优化的缓冲液体系，可从大肠杆菌表达的菌液中安全、便捷、稳定、高效、高质量地提取dsRNA，利用磁珠纯化dsRNA，可有效去除样品中的蛋白质、盐离子、细胞碎片等杂质，最终获得高质量的dsRNA。
产品特点
1. 操作简捷，无须酚氯仿抽提，无须过柱纯化，提取的dsRNA纯度较高。
2. 产品可常温保存，稳定性好。
储存条件
该产品Lysis Buffer B液2 ~ 8℃保存，其余组分均可常温储存。
自备材料
1. 无水乙醇、Nuclease-free离心管及枪头、磁力架需自备。
2. 实验中所使用的无水乙醇需新开封或者日常专用于RNA提取。
使用方法
单次诱导表达5 mL的菌液，提取纯化实验步骤如下：
1. 将诱导表达后的菌液5 mL，置于4℃，6,000×g，5 min离心，弃去培养液，收集细胞菌体。
2. 加入500 μL Fixation Buffer（请先检查是否已加入无水乙醇），使用移液器或涡旋混匀仪振荡至菌体完全重悬。
3. 4℃静置5 min后，10,000×g，离心5 min，弃去培养液，收集细胞菌体。
4. 加入100 μL Lysis Buffer A液，充分重悬细胞菌体，加入10 μL Lysisi Buffer B液，充分混匀后，37℃反应20 min。
5. 4℃，10000×g，10 min离心，收集上清液。
注意：收集的上清液即为dsRNA粗提液，可取少量dsRNA粗提液用琼脂糖凝胶电泳检测。
6. （可选步骤）在上清液中加入适量的DNase I进行消化，37℃反应30 min。
7. 取上一步的上清液置于Nuclease-free的1.5 mL离心管中，加入100 μL的Clean MagBeads，充分混匀后于室温孵育8 min。
注意：Clean MagBeads使用前必须混匀，否则会影响样品的回收率。
8. 将样品置于磁力架上磁吸5 min，待磁珠完全聚集后，小心移除上清液（离心管仍置于磁力架上）。
9. 保持样品置于磁力架上，加入200 μL的Wash Buffer（请先检查是否已加入无水乙醇）漂洗磁珠，室温孵育30 s，小心吸去上清。
注意：通常Wash Buffer最少用量是上述Clean MagBeads用量的2倍，可适当增加用量，Wash Buffer需完全浸没磁珠，加入时注意不要扰动磁珠。
10. 重复上一步操作，共漂洗两次，尽量吸净残留液体。
11. 保持样品置于磁力架上，室温下开盖干燥磁珠3 ~ 5 min，使残留的乙醇等液体完全挥发（磁珠表面无明显光泽即可）。
注意：磁珠开盖干燥时间不可过长，防止磁珠过分干燥龟裂，导致核酸洗脱回收率降低。
12. 将样品从磁力架取出，加入50 ~ 100 µL Elution Buffer（亦可用Nuclease-free Water替代），用移液枪轻轻吹打混匀，室温孵育3 min。
13. 将样品置于磁力架上，待磁珠完全聚集后（约2 min左右），小心吸取上清至新的Nuclease-free离心管中，可预留1 ~ 2 µL液体，以防止吸取到磁珠。
14. 检测提纯的dsRNA样品，并于-80℃储存。
注意事项
1. 可根据上述实验步骤等比例放大或缩小提取纯化不同体积的菌液。
2. 提取较大体积的菌液时，获得dsRNA粗提液较多，需分成多管进行磁珠纯化，推荐每管纯化500 μL dsRNA粗提液。
3. 如需获取更高纯度的dsRNA，可自备DNase I和RNase A进行消化处理，具体操作方法参考试剂说明书进行。
4. 提纯的dsRNA浓度与诱导表达的条件有关，可从培养基、诱导时间、诱导温度以及IPTG浓度等方面进行优化。
复制产品链接
长按图片保存/分享
询盘
询盘
优质、稳定的产品
专业包装 正品保障
急速物流 安全配送
优质服务 售后无忧
关于我们
公司介绍
购物指南
联系我们
加入我们
主营品牌
代理商
服务支持
配送发货
商品验收与签收
运费说明
售后服务
联系我们
地址: 上海市嘉定区新徕路398号1栋2层北区
电话: 021-39520338
邮箱: info@belongbio.com
网址: www.belongbio.com
技术咨询微信
泊朗微信公众号
技术咨询微信
COPYRIGHT©上海泊朗生物技术有限公司 版权所有保留所有权利 沪ICP备2024057378号-1
客服1
客服2
客服4
客服6
客服7